4% PFA〔多聚甲醛〕溶液是一种常用固定剂,大量用途于细胞学、组织学还有生物化学实验中。它通过交联蛋白质、其他生物分子来保持样本结构完整性。以下是配制4% PFA溶液具体步骤:
材料准备
1. 多聚甲醛粉末:确保选用分析纯或更高纯度多聚甲醛。
2. 去离子水:用于溶解多聚甲醛。
3. 氢氧化钠溶液〔约0.5 M〕:作为催化剂,促进多聚甲醛解聚为甲醛。
4. 烧杯、磁力搅拌器:用于加热溶解。
5. pH计:检测最终溶液酸碱度。
操作步骤
1. 称量多聚甲醛
根据目标体积计算所需多聚甲醛质量。例如,配制1升4% PFA溶液要称取40克多聚甲醛。
2. 加入去离子水
将称好多聚甲醛放入干净烧杯中,加入适量去离子水〔通常为总溶液体积一半左右〕,轻轻摇晃使初步分散。
3. 加热和搅拌
使用磁力搅拌器缓慢加热至6070°C,并持续搅拌直至多聚甲醛完全溶解。此时溶液应出现清澈透明状态。
4. 添加氢氧化钠溶液
于溶液接近完全溶解时,逐滴加入0.5 M氢氧化钠溶液,以催化反应加速多聚甲醛分解为甲醛。和此同时监测溶液pH值,通常控制于7.07.5之间。
5. 调整总体积并定容
当溶液达到预期浓度后,用去离子水补充至目标体积〔如1升〕,并再次搅拌均匀。
6. 过滤和分装
使用0.2微米滤膜过滤去除也许存于不溶性颗粒,然后将溶液分装保存于无菌容器内。注意避光存放,避免长时间暴露于空气中导致失效。
注意事项
整个操作需于通风优良环境中进行,因为甲醛具有挥发性、刺激性气味。
配制过程中要控制温度、pH值,否则也许导致溶液不稳固。
一直储存时建议添加少量叠氮化钠作为防腐剂。
通过上述步骤,即可成功配制出符合实验需求4% PFA溶液。这种溶液于使用前还需根据具体实验要求进一步稀释或处理,以确保最佳效果。
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